Showing posts with label Microbiology. Show all posts
Showing posts with label Microbiology. Show all posts

Mengenal Morfologi Koloni Bakteri

Pembahasan mengenai morfologi koloni berhubungan dengan pembahasan sebelumnya mengenai teknik isolasi bakteri menggunakan metode streak plate. Identifikasi morfologi koloni bakteri dapat dilakukan setelah proses isolasi. Pengetahuan mengenai morfologi koloni bakteri mutlak diperlukan jika kalian ingin melakukan identifikasi bakteri.
Seperti yang telah kalian ketahui, koloni terbentuk dari pembelahan sel bakteri yang tumbuh terpisah dari proses isolasi sebelumnya. Morfologi koloni yang terbentuk dipengaruhi oleh factor genetic bakteri dan factor lingkungan seperti ketersediaan nutrisi, suhu, dan waktu inkubasi. Morfologi koloni bakteri dapat berupa warna, ukuran, bentuk, dan tekstur dari suatu koloni.

Bentuk Bentuk Morfologi Koloni

Adapun beberapa bentuk morfologi koloni bakteri yang perlu diketahui adalah sebagai berikut
  • Bentuk (shape) koloni, dapat berupa circular (bulat beraturan), irregular (tidak beraturan), dan punctiform (berupa titik)
  • Bentuk margin atau bentuk pinggiran koloni, dapat berupa entire (halus dan beraturan), undulate (bergelombang), lobate, filamentous (berfilamen), dan rhizoid (bercabang seperti akar)
  • Elevasi koloni, dapat dilihat melalui sisi samping cawan Petri, dapat berupa flat (rata), raised, convex, pulvinate (lebih tinggi dari convex), dan umbonate (raised in the center)
  • Tekstur koloni, dapat berupa moist, mucoid, dan dry (kering)
  • Pembentukan pigmen atau warna koloni, berupa warna koloni yang terbentuk, dapat pula digabungkan dengan penampakan warna lainnya seperti opaque (buram), translucent (agak transparan), shiny (mengkilap), dan dull (pucat)
Bentuk-bentuk morfologi koloni bateri
Bentuk-bentuk morfologi koloni bateri (Sumber: Leboffe & Perce, 2012)


Cara Melakukan Identifikasi Koloni Bakteri

Seperti yang telah saya katakan di awal paragraf, identifikasi morfologi koloni bakteri merupakan tahap yang sangat penting dalam proses identifikasi bakteri. Setelah kalian mendapatkan koloni murni dari hasil isolasi, koloni tersebut dapat langsung diidentifikasi morfologi koloninya, atau apabila ingin lebih meyakinkan, kalian bisa menumbuhkan kultur murni tersebut ke media baru. Adapun langkah-langkah melakukan identifikasi morfologi koloni adalah sebagai berikut
  • Ambillah salah satu kultur murni hasil isolasi
  • Perhatikan semua ciri di atas, lalu catat pada log book kalian, untuk melihat elevasi, dapat dilakukan dengan cara melihat dari sisi cawan Petri. Untuk melihat margin, kalian dapat menggunakan kaca pembesar atau colony counter.
  • Ambil foto sebagai bahan dokumentasi
  • Simpan kembali kultur murni ke dalam incubator

Hal yang harus diperhatikan dalam Identifikasi Morfologi Koloni Bakteri

Ada beberapa hal dapat mempengaruhi ciri-ciri morfologi koloni bakteri, diantaranya adalah ketersediaan nutrisi, suhu, dan waktu inkubasi. Agar dapat memperoleh informasi yang valid dan tidak salah tafsir, kalian harus memperlakukan semua kultur murni dengan perlakuan yang sama, seperti menumbuhkan pada media yang sama, menginkubasi pada suhu yang sama, dan mengamati pada waktu yang sama.

Sumber gambar
Leboffe, M.J., dan Pierce, B.E. 2012. Brief Microbiology Laboratory Theory & Application 2nd Edition. Englewood: Morton Publishing. 

Mengenal Metode Streak Plate dalam Isolasi Bakteri

Media kultur adalah media yang sudah ditumbuhi oleh mikroorganisme. Media kultur terbagi menjadi kultur campuran dan kultur murni. Kultur campuran adalah media kultur yang ditumbuhi oleh beberapa jenis mikroorganisme, sedangkan kultur murni adalah media kultur yang ditumbuhi oleh satu jenis mikroorganisme saja. Proses memindahkan suatu kultur campuran untuk menjadi kultur murni merupakan langkah awal dalam tahap identifikasi mikroorganisme. Proses tersebut juga biasa dikenal dengan proses isolasi. Untuk identifikasi bakteri, jenis isolasi yang sering digunakan adalah metode streak plate (cawan gores).
Dalam proses isolasi metode streak plate, sampel bakteri akan dipindahkan ke media pertumbuhan baru dengan cara menggoreskannya di atas media pertumbuhan tersebut. Kalian dapat memindahkannya menggunakan jarum ose steril atau bisa juga menggunakan cotton swab steril. Penggunaan jarum inokulasi tidak dianjurkan dalam proses isolasi streak plate karena memiliki kemungkinan yang sangat besar untuk merusak media. Pada proses penggoresan (streaking), jumlah sel dari koloni yang telah diambil akan semakin menurun yang pada akhirnya akan menyisakan beberapa koloni yang terpisah. Koloni-koloni yang terpisah tersebut selanjutnya dipindahkan ke media pertumbuhan baru. Hasil dari pemindahan inilah yang disebut dengan kultur murni, dimana yang tumbuh pada media pertumbuhan baru tersebut hanya terdiri dari satu jenis bakteri saja.
Ada beberapa cara menggaris di proses isolasi metode streak plate, diantaranya adalah zig-zag streak dan quadrant streak. Pemilihan cara menggaris ini disesuaikan dengan kebutuhan kalian sebagai peneliti. Walaupun demikian, perlu diingat bahwa kedua cara menggaris tersebut memiliki tujuan yang sama yaitu untuk mendapatkan koloni murni.

Jenis-jenis Metode Streak Plate berdasarkan cara inokulasinya

1. Inokulasi pada cawan agar menggunakan Quadrant Streak Method

Apabila jenis bakteri yang hidup pada media pertumbuhan memiliki jumlah yang sangat banyak, maka kalian bisa menggunakan Quadrant Streak Method. Dari namanya saja, kita dapat mengetahui bahwa metode ini terdiri empat tahap (quad) dan empat goresan yang berbentuk persegi (quadrant). Di tarikan, biasanya terdiiri dari tiga sampai garis zig-zag, dan antara tarikan pertama dan tarikan kedua, harus ada bagian tarikan yang kedua mengenai tarikan yang pertama. Begitu selanjutnya sampai tarikan yang keempat.
Contoh Quadrant Streak Method
Contoh Quadrant Streak Method


2. Inokulasi pada cawan agar menggunakan Zig-zag Streak Method

Berbeda dengan Quadrant Streak Method, penggunaan Zig-zag Streak Method dilakukan pada saat isolasi bakteri dari media pertumbuhan dengan jumlah bakteri yang hidup sedikit. Pemilihan ini didasarkan pada dua hal, yang pertama adalah jumlah bakteri yang hidup dan yang kedua adalah kesukaran dalam menggoresnya. Pada beberapa kesempatan, saya sering menggunakan Zig-zag Streak Method untuk peremajaan kultur bakteri. Beberapa orang sering menyamakan antara Zig-zag Streak Method dengan Continuous Streak Method, padahal, jika kita memperhatikan dengan seksama, terdapat perbedaan yang mencolok yaitu sudut tarikannya. Jika Zig-zag Streak Method setiap sudut tarikannya itu runcing, sedangkan Continuous Streak Method lebih beralur dan tidak bersudut.
Contoh Zig-zag Streak Method
Contoh Zig-zag Streak Method

Metode Sterilisasi Kimia dalam Mikrobiologi

Di dalam mikrobiologi, sterilisasi merupakan proses yang sangat penting untuk dipelajari. Pada pembahasan sebelumnya, saya sudah membahas mengenai metode sterilisasi panas dalam mikrobiologi. Pembahasan kali ini merupakan lanjutan dari metode sterilisasi panas tersebut. Metode sterlisasi kimia dilakukan pada alat dan bahan yang sensitif terhadap panas. Biasanya, alat dan bahan tersebut akan rusak jika disterilkan pada suhu tinggi.

Jenis-jenis Agen Antimikroba Kimiawi berdasarkan Keefektifannya

Kemampuan agen antimikroba kimiawi dikelompokkan berdasarkan efisiensinya dalam membunuh suatu mikroorganisme. Misalnya, seluruh agen germisida dikelompokkan dalam kategori tingkat tinggi karena efektif membunuh seluruh bentuk mikroorganisme, termasuk endospora bakteri. Agen kimiawi dengan kategori sedang didefinisikan dengan tuberkuloisidal karena mampu membunuh Mycobacterium tuberculosis dan umumnya efektif terhadap kebanyakan virus yang resisten seperti virus hepatitis dan rhinovirus. Agen kimiawi dengan kagori sedang ini tidak efektif dalam membunuh endospora bakteri. Agen kimiawi dengan kategori rendah tidak bersifat tuberkuloisidal, tidak efektif terhadap endospora bakteri, beberapa jenis spora fungi, serta naked virus (virus yang tidak memiliki amplop).
Metode sterilisasi kimia dapat dilakukan dengan menggunakan gas (fumigasi atau pengasapan) dan radiasi. beberapa bahan kimia yang dapat digunakan untuk sterilisasi gas adalah etilen oksida, gas formaldehid, asam parasetat, dan glutaraldehid alkalin. Sterilisasi kimia dapat juga dilakukan dengan penggunaan cairan desinfektan berupa senyawa aldehid, hipoklorit, fenolik, dan alkohol.

Mengenal Disinfektan Cair

Disinfektan cair memiliki daya antimikroba yang rendah dibandingkan dengan metode sterilisasi yang lain. Bakteri pembentuk spora dan beberapa virus resisten terhadap sterilisasi jenis ini. Beberapa disinfektan akan ternetralisir oleh bahan organik. Stabilitas larutan terbatas dan waktu penggunaan juga terbatas pada jenis disinfektan dan bagaimana cara disinfektan itu digunakan. Penggunaan disinfektan cair sebagai alat sterilisasi harus mempertimbangkan hal tersebut, begitu juga dengan hal keamanan bagi penggunanya. Disinfektan yang telah diencerkan dapat digunakan untuk disinfeksi ruangan dan peralatan. Biasanya, disinfeksi menggunakan cairan akan dilanjutkan dengan metode sterilisasi lainnya. Disinfeksi menggunakan cairan juga biasa dilakukan pada media yang sudah dipakai, lalu merebus media tersebut sampai mendidih, barulah media itu boleh dibuang ke lingkungan. Hal ini dilakukan agar tidak terjadi pencemaran lingkungan yang mungkin bisa disebabkan oleh mikroorganisme pada media pertumbuhan mikroorganisme hasil penelitian kita.
Penggunaan disinfektan cair pada sterilisasi cawan Petri
Penggunaan disinfektan cair pada sterilisasi cawan Petri

Metode Sterilisasi Menggunakan Filterisasi dan Radiasi

Pada pembahasasan sebelumnya, saya sudah membahas mengenai metode sterilisasi panas. Pada pembahasan kali ini, saya akan membahas metode sterilisasi menggunakan filterisasi (penyaringan) dan radiasi. Salah satu contoh penggunaan metode sterilisasi  menggunakan filter dapat kalian lihat di LAF (Laminar Air Flow). Selanjutnya, contoh penggunaan metode sterilisasi menggunakan radiasi adalah penggunaan sinar UV di tempat pengisian air ulang. Jika kalian sering melihat ada lampu warna ungu di alat penyulingan air isi ulang, kemungkinan lampu tersebut adalah lampu UV yang berfungsi untuk membunuh mikroorganisme yang ada di dalam air. Tapi penting untuk kalian ketahui, tidak semua lampu ungu itu lampu UV yang mampu membunuh mikroorganisme.

Sterilisasi Menggunakan Filter

Seperti yang sudah saya kemukakan sebelumnya, salah satu contoh penggunaan metode sterilisasi menggunakan filter terdapat pada alat Laminar Air Flow. Metode sterilisasi menggunakan filter digunakan untuk mensterilkan bahan yang sensitif dengan panas, misalnya enzim. Membran filter yang digunakan untuk mensterilkan enzim biasanya terbuat selulosa asetat.  Prinsip kerja metode sterilisasi menggunakan membran selulosa asetat adalah memisahkan mikroorganisme dengan bahan yang bahan yang kita perlukan. Ada beberapa hal yang harus kalian ketahui mengenai penggunaan metode sterilisasi menggunakan membran selulosa asetat, seperti biayanya yang mahal, membrannya mudah tersumbat, dan kemungkinan lolosnya virus dari membran tersebut.
Selanjutnya, filter yang digunakan pada Laminar Air Flow adalah filter HEPA (high efficiency particulate air). Filter ini berguna untuk menyaring udara di area kerja mikrobiologis kalian dengan cara menyaring udara sehingga bebas debu dan mikroorganisme. Filter ini juga terdiri dari lipatan-lipatan selulosa asetat.
Penuangan media pertumbuhan bakteri menggunakan Laminar Air Flow
Penuangan media pertumbuhan bakteri menggunakan Laminar Air Flow untuk mencegah terjadinya kontaminasi

Sterilisasi Menggunakan Radiasi

Metode sterilisasi menggunakan radiasi dilakukan dengan menggunakan cahaya UV ataupun dengan menggunakan metode ionisasi (sinar gamma). Sinar UV dengan panjang gelombang 260 nm mampu berekasi dengan asam nukleat mikroorganisme. Sinar UV dapat menyebabkan terganggunya ikatan antara molekul-molekul timin yang bersebelahan dan menyebabkan terbentuknya dimer timin. Pada akhirnya, pembentukan dimer timin akan akan menghalangi replikasi DNA normal dengan menutup jalannya proses replikasi enzim. Dengan kata lain, sinar UV dapat merusak proses perkembangbiakan mikroorganisme, namun tidak berpengaruh pada endospora bakteri. Metode sterilisasi menggunakan radiasi biasa digunakan untuk mensterilkan ruangan.
Metode sterilisasi menggunakan ion (ionisasi) dapat mempenetrasi (menembus) jauh ke dalam suatu objek. Metode ionisasi yang sering digunakan adalah radiasi sinar gamma dari kobalt-60. Metode ini tidak dapat dilakukan di laboratorium biasa karena sifat dari sinar gamma sangat berbahaya bagi tubuh manusia. Sinar gamma lebih kuat daya tembusnya dibandingkan dengan sinar UV, sehingga cocok digunakan untuk mensterilkan bahan plastik sekali pakai, antibiotik, hormon, dan jarum suntik. Metode ionisasi ditujukan untuk merusak asam nukleat mikroorganisme.

Pengertian Sterilisasi dalam Mikrobiologi

Sterilisasi adalah proses yang sangat penting dalam dunia mikrobiologi. Sterilisasi adalah proses menghilangkan segala jenis organisme hidup, dalam hal ini adalah segala jenis mikroorganisme baik itu protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, dan virus yang terdapat pada suatu benda. Proses sterilisasi membutuhkan biocidal agent ataupun proses fisik untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme tersebut.

Sterilisasi harus diatur sedemikian rupa dan tepat untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme. Metode sterilisasi harus disesuaikan dengan target yang akan disterilisasi dan tipe mikroorganismenya. Zat kimia untuk sterilisasi disebut dengan sterilant.

Adapun istilah lainnya untuk sterilisasi adalah disinfeksi, yang artinya adalah proses pembunuhan atau penghilangan mikroorganisme yang dapat menyebabkan penyakit. Zat disinfeksi disebut dengan disinfektan, yang biasanya terdiri dari zat kimiawi dan digunakan pada objek tak hidup. Salah satu contoh dari zat disifenktan adalah alkohol 70%.

Hal lainnya yang berhubungan dengan sterilisasi adalah sanitasi. Proses sanitasi adalah proses pengurangan atau reduksi populasi mikroorganisme sampai mencapai tingkatan yang dianggap aman oleh standar kesehatan masyarakat. Zat sanitasi disebut dengan sanitizer. Contoh sanitizer adalah zat yang digunakan untuk membersihkan tangan sebelum kalian makan.

Selanjutnya, proses yang masih berhubungan dengan sterilisasi adalah antisepsis. Antisepsis adalah proses pencegahan infeksi atau mematikan mikroorganisme dengan cara kimia. Zat antisepsis disebut dengan antiseptik. Proses ini tidak merusak jaringan inang dan tidak lebih toksik dari disinfektan. Antiseptik yang bersifat membunuh mikroorganisme umumnya memiliki nama akhiran -sida (cide). Contohnya adalah  germisida (germicide) yang dapat membunuh banyak patogen tetapi tidak berefek pada endospora bakteri, bakterisida, fungisida, algisida, dan virusida. Sedangkan antiseptik yang tidak bersifat membunuh mikroorganisme maka zat tersebut hanya berfungsi untuk menghambat pertumbuhan mikroorganismenya saja, umumnya memiliki nama akhiran -statik (static). Contohnya dalah fungistatik dan bakteriostatik.

Seperti yang telah dijelaskan di atas, setiap mikroorganisme memiliki sensivitas yang berbeda-beda terhadap metode sterilisasi. Misalnya endospora bakteri resisten (tahan) terhadap panas, iradiasi, dan detergen; virus tanpa envelope resisten terhadap pelarut organik dan detergen; mycoplasma dan virus tidak dapat dihilangkan dengan filter steril yang memiliki ukuran pori 0.2 um.

Hal-hal yang mempengaruhi efisiensi metode sterilisasi dan efektivitas agen mikroba adalah sebagai berikut 
  • Ukuran populasi mikroorganisme
  • Komposisi populasi mikroorganisme
  • Konsentrasi atau intensitas agen antimikroba
  • Lama paparan
  • Temperatur
  • Lingkungan sekitar

Metode sterilisasi dapat dibagi menjadi dua, yaitu metode sterilisasi fisik dan metode sterilisasi kimia. Metode sterilisasi fisik dilakukan dengan menggunakan panas (baik panas kering dan panas basah), radiasi dan filtrasi. Metode sterilisasi kimia dilakukan dengan menggunakan zat-zat kimia.
Sterilisasi fisik panas kering menggunakan Bunsen
Sterilisasi fisik panas kering menggunakan Bunsen

Cara Mendapatkan Kultur Murni melalui Proses Pemindahan Mikroorganisme Secara Aseptik

Media yang mengandung mikroorganisme disebut dengan kultur. Jika kultur tersebut hanya terdiri dari satu jenis mikroorganisme maka disebut dengan kultur murni. Proses pemindahan mikroorganisme merupakan tahap yang sangat penting dalam proses identifikasi. Pemindahan mikroorganisme dari lingkungan awal ke lingkungan yang kita inginkan harus dilakukan secara aseptik, tanpa terkontaminasi, baik oleh perbuatan kalian sendiri, orang lain, lingkungan, sumber inokulasi, ataupun media tujuan inokulasi. Untuk melakukan proses identifikasi, kalian pasti menginginkan media kultur yang murni, bukan? Nah, untuk mendapatkan kultur murni tersebut, silahkan perhatikan beberapa point berikut.

Persiapan Proses Pemindahan Mikroorganisme Secara Aseptik

  • Sterilisasi alat-alat yang digunakan. Sebelum menggunakan alat-alat yang akan digunakan pada proses pemindahan mikroorganisme, kalian harus melakukakan mensterilkan alat-alat tersebut. Metode sterilisasi yang kalian gunakan harus sesuai dengan dengan alat yang kalian gunakan, misalnya, untuk sterilisasi alat yang terbuat dari kaca seperti tabung reaksi, kalian bisa menggunakan oven (sterilisasi kering). Begitu juga dengan alat-alat lainya
Persiapan Sterilisasi Cawan Petri
  • Sterilisasi Ruangan Laboratorium. Sterilisasi ruangan laboratorium sangat penting. Salah satu persyaratan ruangan laboratorium mikrobiologi yang baik adalah memiliki aliran udara satu arah (one way), yaitu udara hanya mengalir ke luar ruangan saja. Proses ini dapat dibantu dengan menggunakan system AC Central. Penggunaan AC Split tidak direkomendasikan pada ruangan laboratorium mikrobiologi karena dapat menjadi sumber kontaminan. Selanjutnya, ruangan dapat disinari dengan menggunakan sinar UV selama 15 menit. Setelah itu ruangan tersebut dapat digunakan untuk kegiatan penelitian mikrobiologi
  • Kurangi Potensi Terjadinya Kontaminasi. Lakukan proses pemindahan mikroorganisme menggunakan ruangan khusus dan menggunakan bantuan Laminar air Flow. Jangan pernah melakukan pemindahan mikroorganisme di ruangan terbuka dan terdapat aliran udara, kecuali aliran udara laminar air flow. Sebelum melakukan pemindahan mikroorganisme, pastikan ruangan sudah disterilkan menggunakan UV. Begitu juga dengan laminar air flow. Pastikan laminar air flow yang akan kalian gunakan sudah benar-benar bersih dan steril. Kalian bisa menyemprot beberapa bagian dalam laminar air flow menggunakan alcohol sebelum menyalakan laminar air flow
  • Tertib. Sebelum melakukan proses pemindahan, kalian harus membuat tata laksana proses pemindahan tersebut, atau paling tidak, kalian sudah memikirkan tahap-tahap yang akan kalian lakukan. Hal ini sangat penting karena dapat meningkatkan keefektifan waktu dan tenaga yang kalian butuhkan
Setelah point-point di atas sudah kalian penuhi, maka kemungkinan keberhasilan untuk mendapatkan kultur murni akan semakin besar. Seperti yang sudah saya jelaskan sebelumnya, kultur murni hanya terdiri dari satu jenis mikroorganisme saja. Jika hasil pemindahan mikrooganisme kalian menghasilkan beberapa jenis mikroorganisme, maka proses pemindahan kalian dapat dikatakan tidak berhasil. Untuk itu, dalam melakukan proses pemindahan ini, jangan membuat satu cawan Petri saja untuk satu jenis mikroorganisme. Biasanya, saya menggunakan tiga cawan Petri untuk satu jenis mikroorganisme pada proses pemindahan bakteri. Ada juga yang menganjurkan mengggunakan 5 cawan Petri. Pemilihan penggunaan jumlah cawan Petri ini harus kalian sesuaikan dengan ketersedian jumlah cawan petri di laboratorium kalian masing-masing.

Demikianlah pembahasan saya mengenai cara mendapatkan kultur murni melalui Proses Pemindahan Mikroorganisme. Jika ada bagian yang masih belum jelas, silahkan bertanya pada kolom komentar yang tersedia di bawah ini.

Cara Membuat Media Nutrient Agar dan Nutrient Broth

Kegiatan menimbang media mikrobiologi
Kegiatan menimbang media mikrobiologi

Saat masuk praktikum mikrobiologi, media apakah yang pertama kali diajarkan untuk kalian buat? Saya yakin sebagian besar dari kalian akan menjawab media Nutrient Agar ataupun Nutrient Broth. Pada dasarnya, media ini cukup mudah untuk dibuat. Namun, jika kalian tidak teliti, maka media yang kalian buat bisa gagal. Nah, bagaimana sih yang dikatakan media gagal itu? Silahkan baca sampai habis ya.
Nutrient agar dan Nutrient broth adalah media yang paling banyak digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Media ini dapat digunakan pada sebagian besar jenis bakteri dan sering kali dipakai sebagai media penyimpanan universal. Oleh karena itu, kandungan dari media ini harus memenuhi kebutuhan nutrisi bakteri yang sering ditumbuhkan.  Media nutrient agar dan nutrient broth terbuat dari bahan yang berasal dari tumbuhan (phyton) atau berasal dari hewan (peptone, extrak daging, dll). Karena komposisi karbon dan nitrogen dari bahan tersebut tidak diketahui, maka media ini digolongkan ke dalam kelompok undefined media. Selain itu, media nutrient agar dan nutrient broth juga dikelompokkan ke dalam media kompleks (complex media). Perbedaan nutrient agar dengan nutrient broth terletak pada ada tidaknya kandungan agar pada media tersebut. Nutrient agar mengandung bahan agar sehingga media ini berbentuk padat, sedangkan media nutrient broth tidak mengandung agar sehingga media ini berbentuk cari. Untuk kandungan bahan lainnya, kedua media ini relatif sama.
Seperti yang telah saya sampaikan sebelumnya, membuat media nutrient agar dan nutrient broth relatif mudah. Kalian hanya memerlukan beberapa prediksi dan ketelitian saja. Agar bisa membuat media nutrient agar dan nutrient secara efektif, ikuti langkah-langkah berikut.


1.    Hitung berapa banyak media yang kalian butuhkan.

Melakukan penelitian mikrobiologi itu tidak sulit jika kalian sudah membuat timeline kegiatannya. Pada tahap ini, kalian harus memperkirakan berapa cawan petri atau tabung media yang kalian butuhkan, berapa hari yang diperlukan untuk membuat media tersebut, darimana kalian bisa mendapatkan media tersebut, dll. Ingat, mempersiapkan sedikit lebih banyak itu lebih baik daripada kurang. Karena, jika persiapan alat atau bahan kalian kurang, maka kalian harus mengulangi lagi kegiatan itu dari awal dan dapat mengganggu timeline kegiatan penelitian kalian.
Contoh timeline kegiatan penelitian mikrobiologi
Contoh timeline kegiatan penelitian


2.    Persiapkan Bahan dengan jumlah yang tepat

Berdasarkan komposisi atau susunannya, media dapat dibagi ke dalam tiga kelompok yaitu media alami, media semi sintesis, dan media sintesis. Media nutrient agar dan media nutrient broth ini termasuk ke dalam kelompok media semi sintesis dan sintesis. Itulah sebabnya, terdapat dua cara untuk membuat media ini. Berikut ini akan saya jelaskan bahan-bahan yang dibutuhkan untuk membuat media nutrient agar dan nutrient broth secara semi sintesis dan sintesis.

Komposisi bahan untuk membuat Nutrient Agar dan Nutrient Broth secara Semi Sintesis

Komposisi bahan nutrient agar semi sintesis
  • Ekstrak daging = 3 gram
  • Peptone = 5 gram
  • Agar = 15 gram
  • Akuades = 1000 mL
Komposisi bahan nutrient broth semi sintesis
  • Ekstrak daging = 3 gram 
  • Peptone = 5 gram 
  • Agar = 15 gram 
  • Akuades = 1000 mL
(Sumber: Leboffe & Pierce, 2012)

Komposisi bahan untuk membuat Nutrient Agar dan Nutrient Broth secara Sintesis

Membuat media sintesis jauh lebih mudah daripada membuat media semi sintesis, karena komposisi media jenis ini sudah di atur sedemikian rupa oleh pabrik, sehingga kita hanya perlu membaca petunjuk penggunaannya saja. Pada pembahasan kali ini, saya akan menunjukkan komposisi bahan nutrient agar yang digunakan laboratorium Prodi Pendidikan Biologi FKIP Unsyiah.
Komposisi bahan nutrient agar sintesis
  • Nutrient agar = 39 gram 
  • Akuades = 1000 mL

Komposisi bahan nutrient broth sintesis
  • Nutrient broth = 13 gram 
  • Akuades = 1000 mL
Berdasarkan komposisi bahan di atas, kalian bisa melihat akuades yang digunakan adalah 1000 mL, dengan kata lain komposisi tersebut digunakan untuk membuat 1000 ml media. Nah, bagaimana jika kalian hanya perlu 300 mL media saja? Atau hanya perlu media untuk beberapa cawan petri saja? Perhatikan pembahasan berikut.
Rumus mengihtung media mikrobiologi
Rumus mengihtung media mikrobiologi
Misalnya kalian membutuhkan 30 cawan petri, selanjutnya kalian harus hitung berapa milliliter media yang kalian butuhkan. Umumnya, satu cawan petri dapat disii 20 sampai 25 milliliter media. Biasanya, saya menggunakan 20 mL. Angka ini saya pilih untuk memudahkan penghitungan dan sudah sesuai dengan ukuran cawan petri yang saya gunakan. Selanjutnya, kalian tinggal mengalikan saja; 30x20= 600 mL media. Untuk nutrient agar sintesis, biasanya dalam 1 liter membutuhkan 28 gram. Lalu, berapa gram media yang digunakan untuk membuat 600 mL media? Perhatikan perhitungan berikut.
Jadi, 30 cawan petri media nutrient agar membutuhkan 16.8 gram serbuk nutrient agar.

3. Sterilisasi lalu Inkubasi

Kegiatan ini terdiri dari tiga tahap. Pertama, racik. Setelah menimbang media, campurlah media tersebut dengan akuades. Jangan lupa untuk menambahkan zat anti jamur agar media terhindar dari kontaminasi jamur. Selanjutnya, media dihomogenkan menggunakan hot plate stirrer. Kedua, sterilisasi. Setelah media homogen, sterilkan media beserta alat-alat yang diperlukan menggunakan autoclave dengan suhu 121ยบC dan tekanan 1 atm selama 15 menit. Ketiga, inkubasi. Setelah proses sterilisasi selesai, maka dilanjutkan dengan proses penuangan media ke dalam cawan petri. Kegiatan ini harus dilakukan di dalam laminar air flow. Setelah proses penuangan, pengeringan, dan sealing media selesai dilakukan, masukkan media tersebut ke dalam inkubator selama 1x24 jam. Hal ini bertujuan untuk melihat ada tidaknya media yang terkontaminasi. Media yang terkontaminasi dapat ditandai dengan tumbuhnya mikroorganisme yang tidak diinginkan.

Demikianlah 3 langkah efektif dalam membuat media nutrient agar dan nutrient broth. Keberhasilan membuat media ini sangat ditentukan oleh ketelitian dan kebersihan kalian. Jika tidak, media yang kalian buat bisa gagal. Media bisa gagal jika media tersebut encer atau terlalu keras (karena salah takaran), terkontaminasi mikroorganisme (karena tidak steril pada proses sterilisasi dan penuangan), dll. Jadi, telitilah dalam membuatnya ya…

Sumber bacaan

Leboffe, M.J., dan Pierce, B.E. 2012. Brief Microbiology Laboratory Theory & Application 2nd Edition. Englewood: Morton Publishing.